染料的标记与荧光成像效果密切相关,下面是一些常见细胞器荧光标记的经验分享,供大家参考:
一、线粒体
1. Mito tracker green,Mito tracker red和Mito tracker deep red可以固定使用。
2. Mitotracker系列染料比较亮,拍单帧可以出效果,但是拍长时程很容易光漂白。长时程染料更推荐用PK mito Orange, PK mito red, PK mito deep red 。
3. 除了染料之外,现在也有质粒可供选择,可以选择商业质粒,质粒可以固定使用。
二、内质网
1. 染料可以使用ER tacker标记,但相对比较容易漂白,且没有很好的特异性。
2. 更推荐使用质粒标记,可选择商业质粒标记。其中,halo-tag标记的ER质粒效果很不错。
三、溶酶体
1. 染料可以使用Lyso viewer488/561/640三种染料标记,但是不适用于固定细胞,且该染料抗漂白较差。
2. 可尝试SiR-lysosome(Spirochrome品牌\浦海景珊代理)或者lyso-brite,但货期较长。
3. 还可使用质粒去标记。
四、微丝
1. 活细胞标记可以选择用SiR-Actin去标记,除了染料外还可以用质粒去标记。
2. 固定细胞可以选择用鬼笔环肽标记,Phalloidin Alexa Fluor-488/555/637可以用于标记固定的Actin。
五、微管
1. 活细胞可以选择用SiR-tubulin标记。
2. 也可使用质粒去标记。
六、膜相关
可以选择用DIO和DIL染料标记。