细胞污染的常见类型及处理措施

细胞培养是生命科学研究的基础，然而污染问题却频频困扰实验进程。一旦发生污染，轻则影响实验结果，重则导致细胞全部丢弃、数月心血付诸东流。究竟有哪些常见的污染类型？又该如何识别与处理？本文将带您系统梳理细胞培养中的四大类污染及其应对策略。

1. 细菌污染

细菌污染是细胞培养中最常见的污染类型，如大肠杆菌、假单胞菌、白色葡萄球菌等。污染发生后，培养液通常会出现浑浊、pH值下降并变黄。在倒置显微镜下观察，可见大量细沙状或颗粒状细菌移动，严重时细胞表面和背景中密布细菌团块。

处理建议：细菌污染多在开放操作（如传代、换液）后发生，增生迅速，一般在48小时内即可察觉。建议在操作后密切观察2天，以及时发现并处理。初期可尝试在培养液中加入5–10倍常规剂量的双抗（如青霉素-链霉素）进行冲击治疗，24–48小时后更换新鲜培养液。对于严重污染（如打翻培养瓶、使用污染液源），可考虑使用西司他丁钠+亚胺培南联合处理。

2. 真菌污染

真菌污染包括曲霉、念珠菌、毛霉和酵母等多种类型。其污染迹象与细菌不同：培养液往往保持清亮，但会出现白色或浅黄色漂浮物。在显微镜下可观察到菌丝体呈丝状、管状或树枝状分布，初期可能容易被误认为细胞碎片。

处理建议：可尝试加入抗真菌药如制霉菌素或两性霉素B，但需注意其对细胞自身也具有较强毒性。同时应对环境进行彻底消毒，包括使用新洁尔灭、75%酒精擦拭和紫外照射，并在水盘中放置硫酸铜抑制真菌繁殖。如非珍贵细胞株，建议直接丢弃并彻底消杀环境。

3. 支原体污染

支原体是一种介于细菌和病毒之间的微小微生物，直径仅0.2µm，无法通过常规过滤去除，普通显微镜下也难以辨识。污染后细胞往往没有明显变化，或仅出现增殖缓慢、部分细胞变圆脱落等现象，因此极易被忽视，却可能导致广泛交叉污染。

处理建议：支原体污染隐蔽性强，需依靠专门的支原体检测试剂盒进行定期筛查。常规换液仅能暂时缓解，无法根除。推荐使用商品化的支原体清除试剂盒（如Mynox®或Plasmocin®）进行处理，并需在处理后再次检测确认清除效果。

4. 细胞交叉污染

交叉污染主要指不同细胞株之间因操作不当或器材混用导致的污染。其中最著名的是HeLa细胞污染事件，迄今已有数十种细胞系被其污染，导致大量发表数据无效。

处理建议： 严格规范实验操作：不同细胞株独立使用培养器具、严格执行操作分区与生物安全规范；定期进行STR鉴定确认细胞身份；建立清晰的细胞管理及标识系统，避免混淆或交叉使用。

污染防控重于治理！建议实验人员建立严格的无菌操作意识，定期对环境、试剂和细胞进行质控检测，并做好早期监测与记录。一旦污染发生，应根据污染类型和细胞价值“因况施策”，必要时果断废弃，以免波及整个培养系统。