荧光样本制备tips之细胞培养

好的样本状态是保证好的超分辨荧光成像的关键，那好的超分辨荧光成像样本状态荧光怎么培养细胞呢？

良好的细胞状态是保证样品质量的第一步：爬片/铺皿密度应当适中，保证细胞可以在玻片/皿底尽量铺展。

1. 细胞形态：细胞一般呈现为健康的、均匀的形态，边缘平滑，细胞间有一定间隙但不拥挤。

2. 细胞排列：细胞通常呈单层排列，形成均匀的层状结构。

3. 细胞数目：细胞密度适中，不会出现过度拥挤的现象，也不会出现细胞缺失。

4. 细胞活性：细胞呈现典型的活跃形态，细胞核清晰，细胞质丰富，没有明显的死细胞。

细胞培养tips：

1. 无菌操作

     1）确保试剂无污染:完全培养基配制好后用0.22μm滤网过滤使用为佳。

     2）保证培养箱清洁、无菌。

     3）每次从外返回超净台都需使用75%乙醇对手部灭菌。

     4）完成细胞传代后，需要紫外照工作台30min。

2. 细胞传代

     1）提前十五分钟预热培养基、PBS、胰酶。

     2）控制好胰酶消化时间，不宜过长。

     3）停止消化和离心后重悬细胞时，注意要轻轻吹打细胞，避免产生气泡。

     4）控制好传代密度，1:3或1:2传代为佳。

3. 培养载体

为了得到更好的成像结果，我们更推荐使用#1.5H的玻片和成像小皿作为细胞载体，尤其是TIRF-SIM的实验。玻片和小皿的具体型号如下：