细胞生长状态判定方法

细胞的生长状态与实验推进密切相关，准确判定细胞状态就很关键，细胞状态的判定方法主要包括以下3种：

一、形态学观察（最简单、最直观）

经传代或换液后生长状况良好的细胞在显微镜下观察，透明度大、折光性强、轮廓不清。用相差显微镜观察能看清部分细胞的细微结构，细胞处于对数生长期时也可见到很多处于分裂期的细胞；细胞生长状态不佳时，细胞折光性变弱、轮廓增强，胞质中常出现空泡、脂滴、颗粒样物质，细胞之间空隙加大，细胞变得不规则，失去正常生长的特点。

二、生化检测（分子级别测量）

原理：利用不同状态细胞特有的生化标志物进行检测。

常用方法：

1. 台盼蓝/吖啶橙染色：死细胞的细胞膜不完整，染料会进入细胞使其变蓝，活细胞则拒染。这是最经典的细胞活力计数方法。

2. 荧光染色/流式细胞术：

     1）Annexin V/PI 双染： 是区分早期凋亡（Annexin V+）、晚期凋亡/坏死（Annexin V+/PI+）和活细胞（双阴性）的“金标准”。

     2）DAPI/Hoechst：用于观察细胞核形态，凋亡细胞核会呈致密浓染的碎片状。

3. 检测Caspase酶活性： Caspase是细胞凋亡过程中的关键执行者，其活性升高是凋亡的明确信号。

三、功能学检测（考察细胞的“工作能力”） 

1. MTT/CCK-8 assay： 检测细胞的代谢活性，间接反映细胞增殖和活力情况。活性越高，吸光度值越大。

2. 克隆形成实验： 评估单个细胞的增殖和生存能力，能形成大克隆的细胞才是真正的“强者”。

判定细胞状态是一门综合的艺术，往往需要多种技术联用，从形态、生化到功能多个维度进行交叉验证，才能得出最准确的结论。